钙黄绿素-AM (Calcein-AM) 和碘化丙啶 (PI) 溶液，分别对活细胞和死细胞染色，可一起运用，对活细胞和死细胞进行荧光染色。Calcein-AM 的乙酸甲基酯亲脂性很高，使其可透过细胞膜。虽然 Calcein-AM 自身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶效果，Calcein-AM 能脱去 AM 基，发生的 Calcein 能宣布强绿色荧光 (激起: 490 nm，发射: 515 nm)，因而 Calcein-AM 仅对活细胞染色。另一方面，作为核染色染料的 PI 不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而抵达细胞核，并嵌入细胞的 DNA 双螺旋由此发生赤色荧光 (激起: 535 nm，发射: 617 nm)。因为 Calcein 和PI-DNA都可被 490 nm 激起，因而可用荧光显微镜一起调查活细胞和死细胞。用 545 nm 激起，仅可调查到死细胞。

　　保存主张：Calcein-AM/PI，活细胞/死细胞双染试剂盒保存：-20℃枯燥避光 有效期一年。

　　以 HeLa 细胞染色为例，请留意不同的细胞品种、不同浓度，有不同的调查条件。

　　留意：因为 Calcein-AM 的稳定性比较差，此染色工作液有必要现配现用，并且在当天用完。

　　1) 染色 HeLa 细胞等贴壁细胞时，先用 Trypsin-EDTA 等消化细胞，制备成细胞悬液。

　　3) 去除上清液，参加 PBS 缓冲液，细胞数量调整至 1×105-1×106个/ml。再用移液器充沛混匀。

　　4) 因为培养基中的血清等成分含有酯酶，Calcein-AM 会分化，会导致空白上升，所以要离心数次，用PBS 洗刷数次直到彻底洗净。

　　5) 将 200 µl 细胞悬液移至小试管中，参加 100 µl 染色溶液，在 37℃下孵育 15 分钟。

　　7) 在荧光显微镜下，先用 490±10 nm 波长激起，调查黄绿色的活细胞，还能够一起调查到赤色的死细胞，然后用545 nm波长激起，能清楚看到赤色的死细胞。回来搜狐，检查更加多